Pylväskromatografia on tekniikka, jota käytetään yhdisteiden erottamiseen ja puhdistamiseen perustuen niiden vuorovaikutukseen kiinteän faasin ja liikkuvan faasin kanssa. Pylväskromatografiaa on viisi päätyyppiä:
Adsorptiokromatografia:
Mekanismi: Riippuu yhdisteiden adsorptiosta stationäärifaasiin.
Kiinteä vaihe: Kiinteä aine, kuten silikageeli tai alumiinioksidi.
Mobiilivaihe: Neste tai kaasu, joka siirtää näytettä kolonnin läpi.
Sovellus: Ei-polaaristen tai kohtalaisen polaaristen yhdisteiden erottaminen.
Partitiokromatografia:
Mekanismi: Erotus tapahtuu yhdisteiden jakautumisen perusteella kahden nestefaasin välillä: toinen on sitoutunut kiinteään faasiin ja toinen toimii liikkuvana faasina.
Kiinteä vaihe: Pinnoitettu neste inertillä kiinteällä alustalla.
Mobiilivaihe: Neste, joka virtaa kolonnin läpi.
Sovellus: Polaaristen yhdisteiden, kuten aminohappojen ja proteiinien, erottaminen.
Ioninvaihtokromatografia:
Mekanismi: Perustuu sähköstaattiseen vetovoimaan varautuneiden yhdisteiden ja vastakkaisesti varautuneen kiinteän faasin välillä.
Kiinteä vaihe: Varattuja ryhmiä sisältävä ioninvaihtohartsi.
Mobiilivaihe: Nestepuskuri, jonka ionivahvuus ja pH vaihtelevat.
Sovellus: Biomolekyylien, kuten proteiinien, peptidien ja nukleotidien, puhdistus.
Geelisuodatuskromatografia (kokoekskluusiokromatografia):
Mekanismi: Erottelee yhdisteet niiden molekyylikoon perusteella.
Kiinteä vaihe: Huokoiset geelihelmet, kuten Sephadex tai agaroosi.
Mobiilivaihe: Vesipitoinen tai orgaaninen liuotin.
Sovellus: Makromolekyylien, kuten proteiinien ja polymeerien, erottaminen.
Affiniteettikromatografia:
Mekanismi: Hyödyntää spesifisiä vuorovaikutuksia kiinnostavan yhdisteen ja stationaarifaasiin kiinnittyneen ligandin välillä.
Kiinteä vaihe: Matriisi, jossa on immobilisoituja ligandeja (esim. vasta-aineita, entsyymejä tai reseptorimolekyylejä).
Mobiilivaihe: Nestemäinen puskuri; eluointi saavutetaan tyypillisesti muuttamalla pH:ta, ionivahvuutta tai lisäämällä kilpailevaa molekyyliä.
Sovellus: Biomolekyylien, kuten entsyymien, vasta-aineiden ja nukleiinihappojen, erittäin spesifinen puhdistus.
Jokainen kromatografiatyyppi valitaan erotettavien yhdisteiden ominaisuuksien ja halutun käytön perusteella.